PRODUÇÃO DE EMBRIÕES IN VITRO APARTIR DE OÓCITOS OBTIDOS EM DIVERSOS MOMENTOS DA ONDA FOLICULAR
Resumo
A produção in vitro de embriões bovinos, é uma importante biotécnica de reprodução assistida, a qual permite a interação do espermatozóide com o oócito fora do trato reprodutivo feminino, com a formação de um novo indivíduo. O processo envolve as etapas de colheita e maturação in vitro dos oócitos, fertilização in vitro e o cultivo in vitro de zigotos e estruturas embrionárias fora do útero animal, ao contrário da clássica transferência de embriões. Os oócitos colhidos para a produção in vitro são obtidos de folículos em diferentes etapas do desenvolvimento e em fases distintas do ciclo estral, portanto, expostos a diferentes concentrações de estradiol, progesterona, LH e FSH. Objetivou-se avaliar a influência da estimulação ovariana e da fase da onda folicular na qualidade e quantidade dos oócitos recuperados em fêmeas Girolando. As fêmeas utilizadas foram previamente submetidas a exame ultra- sonográfico para verificação de ciclicidade, observando a presença de corpo lúteo. As fêmeas foram separadas aleatoriamente, em três grupos de 05 animais, onde o grupo 1 (controle – não recebeu tratamento estimulatório, apenas a OPU) o grupo 2 (tratamento estimulatório com 40 UI de hormônio folículo estimulante, administrados via intramuscular no quinto dia do dispositivo intravaginal, seguida de OPU) e o grupo 3 (mesmo tratamento estimulatório do Grupo 2, acrescentando uma aplicação de 12,5 mg (hCG) 12 horas após a aplicação de FSH, seguida de OPU). O equipamento de punção folicular foi composto por um aparelho de ultra-som Pimedical (Aquila), os ovócitos foram classificados nas categorias I, II e III, considerados como de boa qualidade e viáveis para FIV. Os CCO's foram maturados in vitro em gotas de 50 a 200 ìL. Os dados experimentais foram submetidos à análise de variância e as médias dos tratamentos, pelo teste de Tukey (P < 0,05). O trabalho foi realizado com fêmeas da Raça Girolando estimuladas na primeira onda de crescimento folicular. Quando os resultados foram comparados, considerando-se a resposta estimulatória, verificou-se que o número de folículos no dia da OPU das novilhas estimuladas com FSH foi significativamente superior em relação às demais. Da mesma forma verificou-se diferenças para o número de oócitos recuperados e maturados e total de blastocistos. Comparando as variáveis totais de estruturas clivadas em relação à estimulação hormonal, verificou-se diferenças significativas nas fêmeas que receberam associação de FSH + hCG, mas apresentou resultados inferior ao total de blastocistos produzidos, comparados com o grupo estimulado apenas com FSH. Utilizou-se também o LH exógeno para induzir a ovulação do folículo dominante dessa onda, favorecendo o início de uma nova onda de crescimento folicular, que foi então considerada a primeira para efeito de colheita dos oócitos. As fêmeas estimuladas, apresentaram a maioria dos folículos com diâmetro acima de 8 mm, verificando-se porém, maior homogeneidade nos diâmetros dos folículos das novilhas a estimulação com FSH. Conclui-se que a s novilhas Girolando estimuladas com FSH apresentaram maior número de oócitos recuperados, embriões de melhor qualidade e maior taxa de blastócitos.
Palavras-chave: criopreservação, folículos, Girolando, ovócitos, reprodução
