Produção de lisado hepático de ratos Wistar para análise de capacidade de metabolização de CYP3A

Resumo

Para testar a viabilidade de novos protótipos de fármacos, deve-se avaliar, dentre outras, a sua
capacidade de causar interação medicamentosa com outros fármacos. As interações farmacológicas
na fase de biotransformação são muito comuns e podem ser causadas por substâncias que inibem
enzimas CYP450 aumentando a biodisponibilidade de fármacos metabolizados pela subfamília
inibida. O objetivo deste trabalho é produzir um concentrado de enzimas microssomais viáveis a partir
de tecido hepático extraído de ratos Wistar. 6 ratos foram eutanasiados em câmara de CO2 e seus
fígados extraídos cirurgicamente. A massa hepática foi triturada e sofreu centrifugações sucessivas
até a obtenção do lisado contendo as enzimas microssomais. A quantidade de proteínas totais foi
determinada pelo método de biureto. O lisado foi aliquotado em eppendorf® e armazenado em
nitrogênio líquido. O procedimento gerou 18 mL de lisado contendo 6,7 mg/mL de proteínas totais,
quantidade superior a outros protocolos de extração de enzimas hepáticas. Este lisado será útil para
o desenvolvimento de testes de atividade enzimática de subfamílias CYP450. Sabe-se que a
subfamília CYP3A metaboliza midazolam, dessa forma, ao se montar um meio reacional contendo
lisado + NADPH + midazolam espera-se que as enzimas CYP3A presentes no lisado sejam capazes
de metabolizar o midazolam.