AVALIAÇÃO DA CAPACIDADE METABOLIZADORA DE ENZIMAS CYP1A2

Resumo

É possível prever possíveis interações medicamentosas entre novas drogas e os medicamentos existentes no mercado. Para isso é necessário avaliar se os candidatos a fármacos apresentam a capacidade de inibir enzimas responsáveis pela biotransformação de outros medicamentos. O objetivo deste trabalho é avaliar a capacidade metabolizadora de enzimas CYP1A2 obtidas da Sigma® para que possam ser posteriormente usadas para o teste de inibição do protótipo de fármaco antitumoral LQFM018. Foram incubados por 10 minutos a 37 ºC: 100µL de solução de fenacetina 10µg/mL e 100µL de tampão fosfato de potássio monobásico pH7,5. Foram acrescentados 100µL da solução contendo enzimas+NADPH (Sigma®). Foram acrescentados 300µL de metanol gelado e a solução foi centrifugada a 13.000g por 10min. A quantidade de fenacetina foi determinada conforme método analítico: Fase móvel isocrática metanol:água (50:50 v/v), fluxo de 1,0mL/min, volume de injeção de 20µL e comprimento de onda de 245nm (padrão interno: salicilamida 5µg/mL). O sinal analítico fornecido pela detecção da fenacetina no meio reacional (na presença das enzimas) foi menor em relação ao sinal obtido para a solução de fenacetina na ausência das enzimas. Isso demonstra que as enzimas  metabolizaram o substrato. A quantidade de fenacetina antes do contato com as enzimas foi aproximadamente 20% maior que após a metabolização.

Palavras-chave: Fenacetina. HPLC-PDA. NADPH. Interação medicamentosa. Biotransformação.